简并引物_简并引物名词解释_pcr扩增(2)

例如：AAAAAAAAAAAAAAAAAAAANNNNNNNNNNAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAA

引物合成单上TM值的可信度有多大？？你可自己找几种算法算一下就知道了~~

: Originally posted by louis_cheung at 2015-10-15 17:39:20

(⊙o⊙)…你这也太···太···

简并碱基也太多了吧？？还是平均分布的···

通常一条引物所含简并碱基一般不超过3~4个吧，这样PCR效果通常比较好~~如果简并碱基太多的话，尽量放在中间，至少远离3'端吧~~

例 ...

您是用普通PCR还是Touchdown PCR做的呢？我自己用codehop设计了几对引物，能不能麻烦您帮忙看一下，谢谢了~

>F-b6 5'-GATGTGCAGAAAGGATGGATTACTytngartayga-3'

degen=32temp= 60.7

>R-e3 5'-AGGATCATCAATATCCAGTTCAATAaaytcnaccca-3'

degen=8 temp= 60.3

: Originally posted by louis_cheung at 2015-10-15 17:39:20

(⊙o⊙)…你这也太···太···

简并碱基也太多了吧？？还是平均分布的···

通常一条引物所含简并碱基一般不超过3~4个吧，这样PCR效果通常比较好~~如果简并碱基太多的话，尽量放在中间，至少远离3'端吧~~

例 ...

另一对：

>F-b6 5'-GATGTGCAGAAAGGATGGATTACTytngartayga-3'

degen=32temp= 60.7

>R-f3 5'-TGAAAATCTGTTTCTGGAATATCTggntcryarca-3'

degen=32temp= 61.8

这两对引物的上游是一样的。今天试了一下 F-b6,R-e3那一对引物的梯度，没有出现条带。不过用的是rTaq酶，实验室目前没有高保真酶。

: Originally posted by 竹砚 at 2015-10-20 16:59:35

另一对：

>F-b6 5'-GATGTGCAGAAAGGATGGATTACTytngartayga-3'

degen=32temp= 60.7

>R-f3 5'-TGAAAATCTGTTTCTGGAATATCTggntcryarca-3'

...

你好，你codehop设计的引物扩增出来没有？选定的引怎么用oligo进行评价？谢谢！

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