上海益生生物技术

D-荧光素

原理

D-荧光素（D-Luciferin）是荧光素酶（Luciferase）的常用底物，其在整个生物技术领域虫荧光素酶，特别是体内成像技术中普遍使用. 它的作用机理是在ATP和荧光素酶的作用下，荧光素（底物）可以被氧化发光. 当荧光素过量时，产生的光量子数与荧光素酶的浓度呈正相关（见下图）.

将带有荧光素酶编码基因（Luc）的质粒转染到细胞中后，将其引入大型动物和小鼠等研究动物体内，然后注入荧光素以通过生物发光成像（BLI）检测光强度的变化. 这样，就可以实时监测疾病的发展状况或药物的治疗效果等. ATP对该反应系统的影响还可以根据生物发光强度的变化指示能量或生命体征.

类别

D-萤光素，钾盐

D-萤光素萤火虫，游离酸

灰白色至浅粉末

除非添加稀碱以促进其溶解，否则该产品很难溶于水.

使用方法

（1）体外实验:

a: 储存溶液配置: 将1g荧光素钠或钾盐溶解在33.3 ml水中，以制备30 mg / ml的储存溶液. 充分混合并用0.2μm滤膜过滤（可以吹入惰性气体，例如氮气，以防止氧化. ）-80℃，避光，一年内有效.

b: 使用: ①在黑暗中在冰上解冻（如果更难在冰上除霜，请短暂地温浴并轻轻混合）. ②用1: 200至150μg/ ml的培养基稀释原液. ③除去培养细胞的培养基，直到没有残留为止. ④在进行图像分析之前，向细胞中加入1×荧光素工作液，然后进行图像分析（或者细胞可以在37℃下短时间孵育约5分钟，以检测和增强信号）

（2）体内成像:

a: 工作溶液配置: ①将1 g荧光素钾或钠盐溶于66.6 ml不含Ca2 +和Mg2 +的DPBS中，并配置为15 mg / ml溶液. ②混合均匀并用0.2μm滤膜过滤（可以吹入氮气等惰性气体以防止氧化. ）在-80℃的黑暗处储存，一年内有效.

b: 使用: ①在黑暗中冰上解冻（如果更难在冰上除霜，则短暂地温浴并轻轻混合）.

②根据动物的体重150 mg / kg进行注射（例如，需要向20 g小鼠注射200μl）

③注入体内10-20分钟（当光信号达到最大///强烈的稳定平稳期时），然后进行成像分析.

注意: 建议为每种动物模型建立荧光素酶动力学曲线，以确定最大/最高信号检测时间和信号平稳期.

注射方法

（1）腹腔注射:

将底物注入腹腔. 建议剂量为150 mg / Kg（例如，一只体重为20 g的小鼠需要注射200μl）. 使用25 G针和1 ml注射器.

方法如下:

将针以30°斜向上插入5毫米.

（2）静脉注射:

小鼠的静脉注射通常注射到小鼠的尾巴或眼眶静脉中. 静脉注射的推荐剂量与腹膜内注射的剂量相同，为150 mg / Kg. 所注入液体的最大体积不得超过血液体积的10％. 通常，20 g小鼠的血液量为2 ml，因此最大注射量应为200μl. 使用带26 G针的1 ml注射器或带28 G针的胰岛素注射器，以确保注射器中没有气泡. 注射前，将动物置于加热灯下约5分钟，或将尾巴浸入温水中以扩张血管. 在过程中，将小鼠固定在小鼠试管或烧杯中，尾巴用乙醇消毒，然后缓慢注射.

客户示例

TIPE2抗炎因子在乳腺癌动物模型中的抗肿瘤治疗作用

选自文献: Zhang Z，Li L，Cao S等. 关键词: TIPE2，基因传递，通过CD8 +，T和NK细胞介导的抗肿瘤反应抑制乳腺癌的发展和转移分子免疫学，2017，85: 230.

常见问题解答

Q1: 荧光素的纯度对实验有影响吗？

A: 有影响. 99％的纯度更好.

Q2: 甲虫萤光素和萤火虫萤光素之间有区别吗？

A: 两者之间没有区别.

Q3: 如何溶解荧光素虫荧光素酶，溶液稳定吗？

A: 荧光素钾盐在水中的溶解度为60mg / ml，荧光素钠盐的溶解度为100mg / ml. 荧光素游离酸不溶于水，但在甲醇中的溶解度为10 mg / ml，在DMSO中的溶解度为50 mg / ml.

荧光素钠盐和钾盐水溶液在-80℃下短时间保存，对实验效果无明显影响. 实验表明，将荧光素溶解在脱氧水中会更稳定.

对于一些更敏感的测试，为了控制测试中的可变因素，建议使用新鲜配制的反应溶液. 例如，低浓度的萤光素酶或次优的反应条件需要高质量的底物来进行反应.

Q4: 荧光素钠盐和荧光素钾盐有什么区别？

A: 目前的研究并未发现两者的使用效果有所不同，只是物理特性上的细微差别，例如荧光素钠盐的溶解度将高于荧光素钾盐. 但是，在体内实验研究中，更多的研究人员倾向于选择荧光素钾盐. 据不完全统计，钾盐的使用量是钠盐的三倍.

Q5: 荧光素钠盐，荧光素钾盐和荧光素游离酸有什么区别？

p: 游离酸不溶于水，在甲醇中的溶解度为10 mg / ml，在DMSO中的溶解度为50 mg / ml. NaOH和KOH弱碱也可用于调节溶液的pH值. 荧光素的钠盐或钾盐在使用过程中会更方便，尤其是在体内成像实验中，因为它可以溶于水，所以反应毒性较小.

Q6: 为什么在溶解钠或钾荧光素时必须使用不含Ca2 +或Mg2 +离子的PBS？还有其他盐溶液可溶解荧光素吗？

A: PBS或其他磷酸盐缓冲液或DPBS通常用于生物学研究或细胞相关研究. PBS / DPBS是等渗溶液，pH在7.2-7.6之间. DPBS和PBS之间没有区别，但是在正常情况下，DPBS中不含钙和镁离子. 钙和镁离子可能会抑制某些蛋白酶的活性. 另外，Mg 2+是催化荧光氧化的重要因素，而Ca 2+是与腔肠素氧化有关的离子. 也可以使用其他盐溶液溶解荧光素，但要避免溶液中阳离子对实验的影响.

Q7: 荧光素酶的发光特性？

A: 向小鼠腹膜内注射萤光素的大约1分钟后，能够表达萤光素酶的细胞开始发光，强度在10分钟后达到稳定的最高和/或最高点，并持续约20- 30分钟后之后，衰减开始，大约3小时后，荧光素被消除，所有的发光消失了. 最佳检测时间是注射后15-35分钟内. 动态曲线如下:

Q8: 如何向小鼠注射荧光素，注射方法有何区别？

A: 可以通过腹膜内注射或尾静脉注射将荧光素注射入小鼠. 它可以在大约1分钟内传播到小鼠的整个身体. 在大多数情况下，荧光素浓度为150 mg / kg. 对于20克的小鼠，请使用约3毫克的荧光素. 对于腹膜内注射，扩散较慢，发光开始较慢，发光持续时间较长. 尾静脉注射荧光素时，扩散快，发光开始快，但发光时间短.

Q9: 荧光素底物能否穿透血脑屏障？

A: 荧光素底物约为280道尔顿. 荧光素的水溶性和脂肪溶解性都非常好，并且很容易穿透细胞膜和血脑屏障.

Q10: 荧光素酶的表达稳定吗？

A: 通过稳定的筛选和其他过程，荧光素酶基因可以插入细胞染色体中. 当细胞分裂，转移和分化时，萤光素酶也会持续稳定地表达. 荧光素酶的半衰期约为3小时，因此只有活细胞才能连续表达荧光素酶.

产品信息

D-荧光素钠D荧光素钠盐

40901ES01 / 02/03/08/10

1008/2556/3996/15876/31212

D-荧光素，钾盐D

1000/2600/3996/14898

D-萤光素萤火虫，游离酸D萤火虫荧光素，游离酸

腔肠素原生腔肠素

腔肠素400 a腔肠素400a

即用型腔肠素h即用型腔肠素h

腔肠素hcp腔肠素hcp

腔肠素2-甲基腔肠素

双路荧光素酶报道基因检测试剂盒

荧光素酶报道基因检测试剂盒

萤火虫荧光素酶报道基因检测试剂盒

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