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摘要:
目的 构建应用于体内表达和研究的小鼠IL-1β肝癌细胞特异性表达载体,观察其在小鼠HE-Pa1-6细胞中的表达水平.方法 分离BALB/c小鼠外周血淋巴细胞,LPS刺激后提到总RNA,RT-PCR扩增IL-1β基因,与pLIVETM连接构建pLIVE-IL-1β重组表达载体,并通过菌落PCR、限制性酶谱分析、DNA序列分析进行鉴定.利用TransITTM将pLIVE-IL-1β转染至Hepal-6肝癌细胞,RT-PCR分析IL-1β的表达水平.结果 从小鼠腹腔巨噬细胞中RT-PCR扩增得到-822bp的片段,纯化的PCR产物与pLIVETM同时经Xho I和Nhe I双酶切后连接,菌落PCR鉴定获得多个阳性克隆,经质粒Xho I+Nhe I限制性酶谱分析,酶解出822bp的条带,DNA序列分析证实重组载体中的DNA序列与GeneBank登录的小鼠IL-1β基因一致.将该载体转染Hepal-6细胞.RT-PCR证实,与转染pLIVETM的对照细胞相比,IL-1β的表达水平明显升高.结论 成功构建了小鼠IL-1β肝癌组织特异性表达载体plive-IL-1β,该载体能够在小鼠肝癌细胞中稳定高效表达IL-1β.
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